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pEE 12.4載體基本信息
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出品公司:
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Lonza biologics
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載體名稱:
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pEE12.4, pEE 12.4
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質(zhì)粒類型:
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哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)載體
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高拷貝/低拷貝:
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高拷貝
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啟動(dòng)子:
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hCMV-MIE
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克隆方法:
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多克隆位點(diǎn)，限制性內(nèi)切酶
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載體大小:
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7569 bp
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5' 測(cè)序引物及序列:
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CMV-Forward
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3' 測(cè)序引物及序列:
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--
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載體抗性:
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氨芐
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篩選標(biāo)記:
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GS (Glutamine Synthetase, 谷氨酰胺合成酶)
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備注:
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配套細(xì)胞是NSO細(xì)胞或者CHOK1SV細(xì)胞
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產(chǎn)品目錄號(hào):
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--
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穩(wěn)定性:
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穩(wěn)定表達(dá)
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組成型:
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--
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病毒/非病毒:
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非病毒
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pEE 12.4載體簡介
Lonza生物公司的Glutamine Synthetase(GS, 谷氨酰胺合成酶)基因表達(dá)系統(tǒng)，利用谷氨酰胺合成酶篩選標(biāo)記，能夠高水平的在哺乳細(xì)胞內(nèi)表達(dá)目的基因。
GS酶是生物體內(nèi)以谷氨酸和氨為底物合成谷氨酰胺的酶。GS酶的活性能夠被甲硫氨酸砜亞胺（methionine
sulphoximine，MSX）選擇性的抑制。一些哺乳動(dòng)物細(xì)胞，例如小鼠骨髓瘤細(xì)胞(NSO細(xì)胞系)無法表達(dá)GS，所以在不添加谷氨酰胺的情況下，細(xì)胞將無法生長。對(duì)于這些細(xì)胞系，在無谷氨酰胺的培養(yǎng)基內(nèi)，一個(gè)轉(zhuǎn)染的GS基因可以作為一個(gè)篩選標(biāo)記。其他的一些細(xì)胞系，例如CHO-KI，能夠產(chǎn)生內(nèi)源性的GS酶。對(duì)于這些細(xì)胞，在無谷氨酰胺培養(yǎng)基內(nèi)，在高水平足夠抑制GS酶合成的MSX（甲硫氨酸砜亞胺）的作用下，可以對(duì)細(xì)胞的生長提供一個(gè)選擇壓力。
1992年，Bebbington等首次報(bào)道了使用GS基因細(xì)胞系統(tǒng)表達(dá)重組的抗體。該載體能夠被用來構(gòu)建快速，高產(chǎn)量，穩(wěn)定的單克隆抗體表達(dá)細(xì)胞系。
1 GCCGATAGAG GCGACATCAA GCTGGCACAT GGCCAATGCA TATCGATCTA TACATTGAAT
61 CAATATTGGC CATTAGCCAT ATTATTCATT GGTTATATAG CATAAATCAA TATTGGCTAT
121 TGGCCATTGC ATACGTTGTA TCCATATCAT AATATGTACA TTTATATTGG CTCATGTCCA
181 ACATTACCGC CATGTTGACA TTGATTATTG ACTAGTTATT AATAGTAATC AATTACGGGG
241 TCATTAGTTC ATAGCCCATA TATGGAGTTC CGCGTTACAT AACTTACGGT AAATGGCCCG
301 CCTGGCTGAC CGCCCAACGA CCCCCGCCCA TTGACGTCAA TAATGACGTA TGTTCCCATA
361 GTAACGCCAA TAGGGACTTT CCATTGACGT CAATGGGTGG AGTATTTACG GTAAACTGCC
421 CACTTGGCAG TACATCAAGT GTATCATATG CCAAGTACGC CCCCTATTGA CGTCAATGAC
481 GGTAAATGGC CCGCCTGGCA TTATGCCCAG TACATGACCT TATGGGACTT TCCTACTTGG
541 CAGTACATCT ACGTATTAGT CATCGCTATT ACCATGGTGA TGCGGTTTTG GCAGTACATC
601 AATGGGCGTG GATAGCGGTT TGACTCACGG GGATTTCCAA GTCTCCACCC CATTGACGTC
661 AATGGGAGTT TGTTTTGGCA CCAAAATCAA CGGGACTTTC CAAAATGTCG TAACAACTCC
721 GCCCCATTGA CGCAAATGGG CGGTAGGCGT GTACGGTGGG AGGTCTATAT AAGCAGAGCT
781 CGTTTAGTGA ACCGTCAGAT CGCCTGGAGA CGCCATCCAC GCTGTTTTGA CCTCCATAGA
841 AGACACCGGG ACCGATCCAG CCTCCGCGGC CGGGAACGGT GCATTGGAAC GCGGATTCCC
901 CGTGCCAAGA GTGACGTAAG TACCGCCTAT AGAGTCTATA GGCCCACCCC CTTGGCTTCT
961 TATGCATGCT ATACTGTTTT TGGCTTGGGG TCTATACACC CCCGCTTCCT CATGTTATAG
1021 GTGATGGTAT AGCTTAGCCT ATAGGTGTGG GTTATTGACC ATTATTGACC ACTCCCCTAT
1081 TGGTGACGAT ACTTTCCATT ACTAATCCAT AACATGGCTC TTTGCCACAA CTCTCTTTAT
1141 TGGCTATATG CCAATACACT GTCCTTCAGA GACTGACACG GACTCTGTAT TTTTACAGGA
1201 TGGGGTCTCA TTTATTATTT ACAAATTCAC ATATACAACA CCACCGTCCC CAGTGCCCGC
1261 AGTTTTTATT AAACATAACG TGGGATCTCC ACGCGAATCT CGGGTACGTG TTCCGGACAT
1321 GGGCTCTTCT CCGGTAGCGG CGGAGCTTCT ACATCCGAGC CCTGCTCCCA TGCCTCCAGC
1381 GACTCATGGT CGCTCGGCAG CTCCTTGCTC CTAACAGTGG AGGCCAGACT TAGGCACAGC
1441 ACGATGCCCA CCACCACCAG TGTGCCGCAC AAGGCCGTGG CGGTAGGGTA TGTGTCTGAA
1501 AATGAGCTCG GGGAGCGGGC TTGCACCGCT GACGCATTTG GAAGACTTAA GGCAGCGGCA
1561 GAAGAAGATG CAGGCAGCTG AGTTGTTGTG TTCTGATAAG AGTCAGAGGT AACTCCCGTT
1621 GCGGTGCTGT TAACGGTGGA GGGCAGTGTA GTCTGAGCAG TACTCGTTGC TGCCGCGCGC
1681 GCCACCAGAC ATAATAGCTG ACAGACTAAC AGACTGTTCC TTTCCATGGG TCTTTTCTGC
1741 AGTCACCGTC CTTGACACGA AGCTTCGCGA CGTACGTTCG AACCCGGGCA CGTGCGGACC
1801 GAATTCATTG ATCATAATCA GCCATACCAC ATTTGTAGAG GTTTTACTTG CTTTAAAAAA
1861 CCTCCCACAC CTCCCCCTGA ACCTGAAACA TAAAATGAAT GCAATTGTTG TTGTTAACTT
1921 GTTTATTGCA GCTTATAATG GTTACAAATA AAGCAATAGC ATCACAAATT TCACAAATAA
1981 AGCATTTTTT TCACTGCATT CTAGTTGTGG TTTGTCCAAA CTCATCAATG TATCTTATCA
2041 TGTCTGGCGG CCGCGACCTG CAGGCGCAGA ACTGGTAGGT ATGGAAGATC CCTCGAGATC
2101 CATTGTGCTG GCGGTAGGCG AGCAGCGCCT GCCTGAAGCT GCGGGCATTC CCGATCAGAA
2161 ATGAGCGCCA GTCGTCGTCG GCTCTCGGCA CCGAATGCGT ATGATTCTCC GCCAGCATGG
2221 CTTCGGCCAG TGCGTCGAGC AGCGCCCGCT TGTTCCTGAA GTGCCAGTAA AGCGCCGGCT
2281 GCTGAACCCC CAACCGTTCC GCCAGTTTGC GTGTCGTCAG ACCGTCTACG CCGACCTCGT
2341 TCAACAGGTC CAGGGCGGCA CGGATCACTG TATTCGGCTG CAACTTTGTC ATGCTTGACA
2401 CTTTATCACT GATAAACATA ATATGTCCAC CAACTTATCA GTGATAAAGA ATCCGCGCCA
2461 GCACAATGGA TCTCGAGGTC GAGGGATCTC TAGAGGATCC TCTACGCCGG ACGCATCGTG
2521 GCCGGCATCA CCGGCGCCAC AGGTGCGGTT GCTGGCGCCT ATATCGCCGA CATCACCGAT
2581 GGGGAAGATC GGGCTCGCCA CTTCGGGCTC ATGAGCGCTT GTTTCGGCGT GGGTATGGTG
2641 GCAGGCCCCG TGGCCGGGGG ACTGTTGGGC GCCATCTCCT TGCATGCACC ATTCCTTGCG
2701 GCGGCGGTGC TCAACGGCCT CAACCTACTA CTGGGCTGCT TCCTAATGCA GGAGTCGCAT
2761 AAGGGAGAGC GTCGACCTCG GGCCGCGTTG CTGGCGTTTT TCCATAGGCT CCGCCCCCCT
2821 GACGAGCATC ACAAAAATCG ACGCTCAAGT CAGAGGTGGC GAAACCCGAC AGGACTATAA
2881 AGATACCAGG CGTTTCCCCC TGGAAGCTCC CTCGTGCGCT CTCCTGTTCC GACCCTGCCG
2941 CTTACCGGAT ACCTGTCCGC CTTTCTCCCT TCGGGAAGCG TGGCGCTTTC TCATAGCTCA
3001 CGCTGTAGGT ATCTCAGTTC GGTGTAGGTC GTTCGCTCCA AGCTGGGCTG TGTGCACGAA
3061 CCCCCCGTTC AGCCCGACCG CTGCGCCTTA TCCGGTAACT ATCGTCTTGA GTCCAACCCG
3121 GTAAGACACG ACTTATCGCC ACTGGCAGCA GCCACTGGTA ACAGGATTAG CAGAGCGAGG
3181 TATGTAGGCG GTGCTACAGA GTTCTTGAAG TGGTGGCCTA ACTACGGCTA CACTAGAAGA
3241 ACAGTATTTG GTATCTGCGC TCTGCTGAAG CCAGTTACCT TCGGAAAAAG AGTTGGTAGC
3301 TCTTGATCCG GCAAACAAAC CACCGCTGGT AGCGGTGGTT TTTTTGTTTG CAAGCAGCAG
3361 ATTACGCGCA GAAAAAAAGG ATCTCAAGAA GATCCTTTGA TCTTTTCTAC GGGGTCTGAC
3421 GCTCAGTGGA ACGAAAACTC ACGTTAAGGG ATTTTGGTCA TGAGATTATC AAAAAGGATC
3481 TTCACCTAGA TCCTTTTAAA TTAAAAATGA AGTTTTAAAT CAATCTAAAG TATATATGAG
3541 TAAACTTGGT CTGACAGTTA CCAATGCTTA ATCAGTGAGG CACCTATCTC AGCGATCTGT
3601 CTATTTCGTT CATCCATAGT TGCCTGACTC CCCGTCGTGT AGATAACTAC GATACGGGAG
3661 GGCTTACCAT CTGGCCCCAG TGCTGCAATG ATACCGCGAG ACCCACGCTC ACCGGCTCCA
3721 GATTTATCAG CAATAAACCA GCCAGCCGGA AGGGCCGAGC GCAGAAGTGG TCCTGCAACT
3781 TTATCCGCCT CCATCCAGTC TATTAATTGT TGCCGGGAAG CTAGAGTAAG TAGTTCGCCA
3841 GTTAATAGTT TGCGCAACGT TGTTGCCATT GCTACAGGCA TCGTGGTGTC ACGCTCGTCG
3901 TTTGGTATGG CTTCATTCAG CTCCGGTTCC CAACGATCAA GGCGAGTTAC ATGATCCCCC
3961 ATGTTGTGCA AAAAAGCGGT TAGCTCCTTC GGTCCTCCGA TCGTTGTCAG AAGTAAGTTG
4021 GCCGCAGTGT TATCACTCAT GGTTATGGCA GCACTGCATA ATTCTCTTAC TGTCATGCCA
4081 TCCGTAAGAT GCTTTTCTGT GACTGGTGAG TACTCAACCA AGTCATTCTG AGAATAGTGT
4141 ATGCGGCGAC CGAGTTGCTC TTGCCCGGCG TCAATACGGG ATAATACCGC GCCACATAGC
4201 AGAACTTTAA AAGTGCTCAT CATTGGAAAA CGTTCTTCGG GGCGAAAACT CTCAAGGATC
4261 TTACCGCTGT TGAGATCCAG TTCGATGTAA CCCACTCGTG CACCCAACTG ATCTTCAGCA
4321 TCTTTTACTT TCACCAGCGT TTCTGGGTGA GCAAAAACAG GAAGGCAAAA TGCCGCAAAA
4381 AAGGGAATAA GGGCGACACG GAAATGTTGA ATACTCATAC TCTTCCTTTT TCAATATTAT
4441 TGAAGCATTT ATCAGGGTTA TTGTCTCATG AGCGGATACA TATTTGAATG TATTTAGAAA
4501 AATAAACAAA TAGGGGTTCC GCGCACATTT CCCCGAAAAG TGCCACCTGA CGTCTAAGAA
4561 ACCATTATTA TCATGACATT AACCTATAAA AATAGGCGTA TCACGAGGCC CTGATGGCTC
4621 TTTGCGGCAC CCATCGTTCG TAATGTTCCG TGGCACCGAG GACAACCCTC AAGAGAAAAT
4681 GTAATCACAC TGGCTCACCT TCGGGTGGGC CTTTCTGCGT TTATAAGGAG ACACTTTATG
4741 TTTAAGAAGG TTGGTAAATT CCTTGCGGCT TTGGCAGCCA AGCTAGATCC GGCTGTGGAA
4801 TGTGTGTCAG TTAGGGTGTG GAAAGTCCCC AGGCTCCCCA GCAGGCAGAA GTATGCAAAG
4861 CATGCATCTC AATTAGTCAG CAACCAGGTG TGGAAAGTCC CCAGGCTCCC CAGCAGGCAG
4921 AAGTATGCAA AGCATGCATC TCAATTAGTC AGCAACCATA GTCCCGCCCC TAACTCCGCC
4981 CATCCCGCCC CTAACTCCGC CCAGTTCCGC CCATTCTCCG CCCCATGGCT GACTAATTTT
5041 TTTTATTTAT GCAGAGGCCG AGGCCGCCTC GGCCTCTGAG CTATTCCAGA AGTAGTGAGG
5101 AGGCTTTTTT GGAGGCCTAG GCTTTTGCAA AAAGCTAGCT TGGGGCCACC GCTCAGAGCA
5161 CCTTCCACCA TGGCCACCTC AGCAAGTTCC CACTTGAACA AAAACATCAA GCAAATGTAC
5221 TTGTGCCTGC CCCAGGGTGA GAAAGTCCAA GCCATGTATA TCTGGGTTGA TGGTACTGGA
5281 GAAGGACTGC GCTGCAAAAC CCGCACCCTG GACTGTGAGC CCAAGTGTGT AGAAGAGTTA
5341 CCTGAGTGGA ATTTTGATGG CTCTAGTACC TTTCAGTCTG AGGGCTCCAA CAGTGACATG
5401 TATCTCAGCC CTGTTGCCAT GTTTCGGGAC CCCTTCCGCA GAGATCCCAA CAAGCTGGTG
5461 TTCTGTGAAG TTTTCAAGTA CAACCGGAAG CCTGCAGAGA CCAATTTAAG GCACTCGTGT
5521 AAACGGATAA TGGACATGGT GAGCAACCAG CACCCCTGGT TTGGAATGGA ACAGGAGTAT
5581 ACTCTGATGG GAACAGATGG GCACCCTTTT GGTTGGCCTT CCAATGGCTT TCCTGGGCCC
5641 CAAGGTCCGT ATTACTGTGG TGTGGGCGCA GACAAAGCCT ATGGCAGGGA TATCGTGGAG
5701 GCTCACTACC GCGCCTGCTT GTATGCTGGG GTCAAGATTA CAGGAACAAA TGCTGAGGTC
5761 ATGCCTGCCC AGTGGGAGTT CCAAATAGGA CCCTGTGAAG GAATCCGCAT GGGAGATCAT
5821 CTCTGGGTGG CCCGTTTCAT CTTGCATCGA GTATGTGAAG ACTTTGGGGT AATAGCAACC
5881 TTTGACCCCA AGCCCATTCC TGGGAACTGG AATGGTGCAG GCTGCCATAC CAACTTTAGC
5941 ACCAAGGCCA TGCGGGAGGA GAATGGTCTG AAGCACATCG AGGAGGCCAT CGAGAAACTA
6001 AGCAAGCGGC ACCGGTACCA CATTCGAGCC TACGATCCCA AGGGGGGCCT GGACAATGCC
6061 CGTCGTCTGA CTGGGTTCCA CGAAACGTCC AACATCAACG ACTTTTCTGC TGGTGTCGCC
6121 AATCGCAGTG CCAGCATCCG CATTCCCCGG ACTGTCGGCC AGGAGAAGAA AGGTTACTTT
6181 GAAGACCGCC GCCCCTCTGC CAATTGTGAC CCCTTTGCAG TGACAGAAGC CATCGTCCGC
6241 ACATGCCTTC TCAATGAGAC TGGCGACGAG CCCTTCCAAT ACAAAAACTA ATTAGACTTT
6301 GAGTGATCTT GAGCCTTTCC TAGTTCATCC CACCCCGCCC CAGAGAGATC TTTGTGAAGG
6361 AACCTTACTT CTGTGGTGTG ACATAATTGG ACAAACTACC TACAGAGATT TAAAGCTCTA
6421 AGGTAAATAT AAAATTTTTA AGTGTATAAT GTGTTAAACT ACTGATTCTA ATTGTTTGTG
6481 TATTTTAGAT TCCAACCTAT GGAACTGATG AATGGGAGCA GTGGTGGAAT GCCTTTAATG
6541 AGGAAAACCT GTTTTGCTCA GAAGAAATGC CATCTAGTGA TGATGAGGCT ACTGCTGACT
6601 CTCAACATTC TACTCCTCCA AAAAAGAAGA GAAAGGTAGA AGACCCCAAG GACTTTCCTT
6661 CAGAATTGCT AAGTTTTTTG AGTCATGCTG TGTTTAGTAA TAGAACTCTT GCTTGCTTTG
6721 CTATTTACAC CACAAAGGAA AAAGCTGCAC TGCTATACAA GAAAATTATG GAAAAATATT
6781 CTGTAACCTT TATAAGTAGG CATAACAGTT ATAATCATAA CATACTGTTT TTTCTTACTC
6841 CACACAGGCA TAGAGTGTCT GCTATTAATA ACTATGCTCA AAAATTGTGT ACCTTTAGCT
6901 TTTTAATTTG TAAAGGGGTT AATAAGGAAT ATTTGATGTA TAGTGCCTTG ACTAGAGATC
6961 ATAATCAGCC ATACCACATT TGTAGAGGTT TTACTTGCTT TAAAAAACCT CCCACACCTC
7021 CCCCTGAACC TGAAACATAA AATGAATGCA ATTGTTGTTG TTAACTTGTT TATTGCAGCT
7081 TATAATGGTT ACAAATAAAG CAATAGCATC ACAAATTTCA CAAATAAAGC ATTTTTTTCA
7141 CTGCATTCTA GTTGTGGTTT GTCCAAACTC ATCAATGTAT CTTATCATGT CTGGATCTAG
7201 CTTCGTGTCA AGGACGGTGA CTGCAGTGAA TAATAAAATG TGTGTTTGTC CGAAATACGC
7261 GTTTTGAGAT TTCTGTCGCC GACTAAATTC ATGTCGCGCG ATAGTGGTGT TTATCGCCGA
7321 TAGAGATGGC GATATTGGAA AAATCGATAT TTGAAAATAT GGCATATTGA AAATGTCGCC
7381 GATGTGAGTT TCTGTGTAAC TGATATCGCC ATTTTTCCAA AAGTGATTTT TGGGCATACG
7441 CGATATCTGG CGATAGCGCT TATATCGTTT ACGGGGGATG GCGATAGACG ACTTTGGTGA
7501 CTTGGGCGAT TCTGTGTGTC GCAAATATCG CAGTTTCGAT ATAGGTGACA GACGATATGA
7561 GGCTATATC
